We discovered that a protein called Wnt7a is elevated and released from newly regenerating muscle fibers in response to muscle injury, triggering a healing response. However, isolating extracellular vesicles (EVs) from muscle tissue is challenging. Traditional methods, like ultracentrifugation, often lead to contamination with non-EV proteins and cellular fragments. To overcome this, we developed a new protocol using Tangential Flow Filtration (TFF) and Size Exclusion Chromatography (SEC). This method allows us to purify Wnt7a associated with EVs (retentate fraction) and free non-EV Wnt7a (permeate fraction). Our optimized protocol removes large EVs through centrifugation, concentrates and washes EVs with TFF, and eliminates remaining soluble proteins with SEC. This approach is effective for isolating EVs from muscle tissue without contamination, improving the reproducibility, efficiency, and purity of EV preparations. The purified EVs maintain structural integrity, making them suitable for various bioactivity and analytic assays in both in vitro and in vivo settings.

  ما کشف کردیم که پروتئینی به نام Wnt7a در پاسخ به آسیب عضلانی از فیبرهای عضلانی تازه بازسازی شده افزایش یافته و آزاد می شود و باعث ایجاد پاسخ درمانی می شود. با این حال، جداسازی وزیکول های خارج سلولی (EVs) از بافت عضلانی چالش برانگیز است. روش‌های سنتی، مانند اولتراسانتریفیوژ، اغلب منجر به آلودگی با پروتئین‌های غیر EV و قطعات سلولی می‌شوند. برای غلبه بر این مهم، پروتکل جدیدی با استفاده از فیلتراسیون جریان مماسی (TFF) و کروماتوگرافی حذف اندازه (SEC) ایجاد کردیم. این روش به ما اجازه می دهد که Wnt7a مرتبط با EVs (قسمت حفظ شده) و Wnt7a غیر EV آزاد (قسمت نفوذی) را خالص کنیم. پروتکل بهینه شده ما EV های بزرگ را از طریق سانتریفیوژ حذف می کند، EV ها را با TFF غلیظ و شستشو می دهد و پروتئین های محلول باقی مانده را با SEC حذف می کند. این رویکرد برای جداسازی EV ها از بافت عضلانی بدون آلودگی، بهبود تکرارپذیری، کارایی و خلوص آماده سازی EV موثر است. EVهای خالص‌شده یکپارچگی ساختاری را حفظ می‌کنند و آن‌ها را برای سنجش‌های مختلف زیست‌فعالیتی و تحلیلی در شرایط in vitro و in vivo مناسب می‌سازد.